华北农学报

作者：赵凯薇, 彭勇, 左卫东, 吴后艳, 任苗, 尹尚莲, 朱玮璟, 郎立新, 季新成, 宋志刚, 艾军, 信吉阁

单位：1 云南农业大学 动物医学院,云南 昆明 650201；2 瑞丽海关综合技术中心,云南 瑞丽 678400；3 勐腊海关综合技术中心,云南 勐腊 666300；4 昆明学院,云南 昆明 650214；5 昆明海关技术中心,云南 昆明 650228；6 海关总署国际检验检疫标准与技术法规研究中心,北京 101500

关键词：牛病毒性腹泻病毒,病毒分离,杆状病毒表达,Erns蛋白,

基金：云南省野外科学观测研究站(202505AM340007); 国家重点研发计划(2022YFC2601605); 云南省院士工作站(2018IC078); 兴滇英才支持计划“青年人才”专项(YNWR-QNBJ-2020-154)

为从疑似阳性的粪便样品中分离牛病毒性腹泻病毒(BVDV),并进一步实现BVDV-Erns蛋白的表达。将实验室保存的BVDV阳性粪便样本,经qPCR检测病原,MDBK细胞分离培养病毒后,通过RT-PCR扩增5'-UTR区域,结合免疫荧光技术验证病毒培养情况;通过MEGA 11.0软件基于5'-UTR序列构建进化树;通过昆虫杆状病毒系统表达BVDV-Erns蛋白,Western Blot以His标签单抗检测蛋白表达。结果表明,从粪便中分离的BVDV毒株经培养后,免疫荧光显示出荧光信号,RT-PCR扩增获得297 bp特异性片段,与理论片段大小一致;5'-UTR序列与BVDV-1型参考株同源性达99%。SDS-PAGE检测结果在44~58 ku处见明显条带,Western Blot经His标签抗体验证呈现特异性反应条带,表明BVDV-Erns蛋白成功表达。该研究成功从粪便中分离出BVDV-1型毒株,命名为BVDV-KMZ,且其5'-UTR区域遗传特征与BVDV-1型高度一致,同时利用昆虫杆状病毒系统表达BVDV-Erns蛋白,Western Blot证实蛋白表达。为进一步建立血清学检测方法、疫苗研发及BVDV-Erns蛋白功能研究奠定基础。

来源：2025年第S1期

《华北农学报》期刊编辑部

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