华北农学报

作者：杨东亮, 邵帅, 纪晓岚, 张德荣, 柏家林, 李琼毅

单位：1 西北民族大学 生物医学研究中心,生物工程与技术国家民委重点实验室,甘肃 兰州 730030；2 西北民族大学 生命科学与工程学院,甘肃 兰州 730030

关键词：细胞系,<i>TRIM21</i>,CRISPR/Cas9,电转染,人宫颈癌细胞HeLa,

基金：西北民族大学中央高校基本科研业务费项目(31920230154); 国家自然科学基金项目(31702234); 甘肃省自然科学基金项目(23JRRA720)

旨在利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,成功构建TRIM21基因敲除的稳定人宫颈癌细胞(HeLa)系。首先,针对TRIM21基因设计并合成了2个特异性的sgRNA(sgRNA1和sgRNA2),通过PCR扩增和无缝克隆技术将其分别克隆至LentiCRISPRv2载体中。随后,利用电转染法将编辑载体转染至HeLa细胞中,并通过嘌呤霉素筛选获得成功整合编辑载体的单克隆细胞系。经Western Blot验证和扩大培养,获得了稳定敲除TRIM21的HeLa细胞系。基于该细胞系,进一步探究了TRIM21在调控Ⅰ型干扰素信号通路中的作用。试验结果表明,TRIM21敲除显著抑制了细胞内MDA5、MAVS和IRF3的表达水平,同时抑制了IRF3的磷酸化,揭示了TRIM21在Ⅰ型干扰素信号通路中的重要调控作用。成功构建的TRIM21敲除HeLa细胞系为深入研究TRIM21调控病毒增殖机制及其在先天免疫应答中的作用提供了可靠的细胞模型;通过优化试验方法,证实了电转染法在构建基因敲除细胞系中的高效性和稳定性,为其他基因敲除细胞系的构建提供了技术参考。

来源：2025年第6期

《华北农学报》期刊编辑部

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