华北农学报

作者：王利娜, 高亢, 康忱, 田哲娟, 李亚栋, 王鹏, 李朝炜, 吴志明

单位：1 河北科技大学 食品与生物学院,河北 石家庄 050018；2 河北省农林科学院 经济作物研究所,河北 石家庄 050051

关键词：番茄褪绿病毒,外壳蛋白,Gateway技术,酵母双杂交,核体系,

基金：河北省农林科学院基本科研项目(2021050201); 河北省农林科学院科技创新专项(2022KJCXZX-JZS-1); 河北省农林科学院科技创新专项(2022KJCXZX-JZS-10)

旨在从cDNA文库中筛选潜在与番茄褪绿病毒(ToCV)外壳蛋白(CP)互作的蛋白,探究ToCV的侵染机制及CP在侵染过程中的功能,以应对当前越夏、秋延后番茄生产中因番茄褪绿病毒病大肆传播而致使番茄产量和品质严重受影响的状况。以感染ToCV的Moneymaker番茄品种作为试验材料,采用Gateway技术构建感染ToCV的番茄核体系酵母cDNA文库,并构建酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-CP(CP-BD)。以CP为诱饵蛋白,通过核体系酵母文库筛选出上百种参与多种生理过程的潜在互作蛋白,并进一步通过一对一的酵母双杂交验证以及NCBI BLAST比对确定与ToCV CP互作的相关蛋白。构建了核体系酵母文库,初级文库总克隆数为1.60×107,重组率达100%,平均插入片段长度超过1 000 bp;次级文库总克隆数同样为1.60×107,重组率为100%,平均插入片段长度大于1 000 bp,达到质量标准,满足后续酵母杂交试验的条件。由文库筛选得到的ToCV CP互作蛋白涵盖了细胞过程、生物调节、细胞物质运输等类别,其中在病毒复制和运输、侵染宿主细胞以及调节宿主细胞的代谢和细胞周期等生物过程相关的蛋白数量较多。此外,还涉及蛋白质结合、核酸结合、水解酶活性等相关蛋白,其中RNA酶最为丰富,在病毒侵染过程中发挥重要作用。最终确定了HSPs、DnaJ与TCPs等30种与ToCV CP互作的蛋白,为后续深入研究ToCV的侵染机制及CP在侵染过程中的功能奠定了良好基础。

来源：2025年第3期

《华北农学报》期刊编辑部

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