华北农学报

作者：侯茂洋, 杨金霖, 崔灿, 陈博, 李伟, 殷恒福, 孙迎坤

单位：1 青岛农业大学 园林与林学院,山东 青岛 266109；2 山东省耐盐碱草木种质创新重点实验室,山东 青岛 266109；3 中国林业科学研究院 亚热带林业研究所,浙江 杭州 311400

关键词：耐冬山茶,酵母双杂交,CjCBF1,低温胁迫,蛋白互作,

基金：山东省自然科学基金面上项目(ZR2023MC156); 国家自然科学基金面上项目(32271839); 山东省青年创新团队项目(018-1622001)

低温是影响山茶在我国北方分布的主要因素,为进一步扩大山茶的分布范围,提升北方园林植物的多样性,以山茶科山茶属植物耐冬山茶岛城春早的叶片为材料,通过Gateway重组技术构建酵母文库,获得的初级文库总克隆数为1.44×107 cfu,次级文库总克隆数为1.12×107 cfu,重组阳性率为100%,酵母文库滴度为1.00×108 cfu/mL,酵母克隆平均插入片段>1 000 bp,符合建库标准。利用双酶切同源重组方式构建诱饵载体pGBKT7-CjCBF1,其在酵母细胞中无毒性及自激活活性。使用质粒共转法进行筛库,获得46个与CjCBF1相互作用的候选蛋白,功能涉及植物生长发育、开花结实及响应胁迫等多个方面,选取CjRAV1作为候选蛋白。参考耐冬山茶转录组数据库和茶树基因组数据库设计引物,克隆得到CjRAV1基因,该基因CDS全长为1 023 bp。生物信息学分析结果显示,该基因编码341个氨基酸,相对分子质量为37.99 ku,蛋白质等电点9.10,不稳定指数34.74,脂肪指数76.60。选取与CjRAV1同源性较近的物种进行氨基酸序列比对并构建系统发育树,发现其与狭叶油茶、君迁子以及中华猕猴桃亲缘关系较近。为了降低筛库的假阳性概率,构建pGADT7-CjRAV1载体,与pGBKT7-CjCBF1进行点对点验证,证实二者之间存在互作关系,为后续深入研究耐冬山茶低温应答分子机制奠定基础。

来源：2025年第3期

《华北农学报》期刊编辑部

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