华北农学报

作者：李有玉, 顾悦, 甘昆发, 崔秀明, 刘迪秋

单位：昆明理工大学 生命科学与技术学院,云南 昆明 650500

关键词：三七根腐病,尖孢镰刀菌,类跨膜蛋白基因,实时荧光LAMP,

基金：国家自然科学基金项目(82060693); 云南省重大科技专项计划项目(202102AA100022)

为了实现对三七根腐病菌的快速准确诊断、及时阻断病菌传播、开展针对性防治,建立了一种现场快速检测三七根腐病菌尖孢镰刀菌的实时荧光LAMP技术。首先从GenBank中筛选出尖孢镰刀菌类跨膜蛋白(TP)基因,并针对其保守区域设计了一套LAMP特异性引物,通过对尖孢镰刀菌LAMP检测体系的反应温度、内引物、外引物、环引物、Mg2+、dNTPs浓度进行优化,并评价体系的特异性及灵敏性,最后应用建立的LAMP检测方法分析三七病株及土壤样品中尖孢镰刀菌的含量。结果表明,LAMP检测方法最佳反应条件为: 反应温度64 ℃,内引物、外引物以及环引物的最佳浓度分别为1.6,0.2,0.1 μmol/L,Mg2+浓度6 mmol/L,dNTPs浓度0.4 mmol/L。利用建立的LAMP检测体系能从7种三七根腐病菌中特异性检测出尖孢镰刀菌,且灵敏度高,检测的最低模板浓度为0.2 pg/μL。此外,将DNA简提法和钙黄绿素指示剂与LAMP检测体系结合,建立了一种三七根腐病菌尖孢镰刀菌的现场快速检测方法,可快速准确检测三七植株及种植土壤中的尖孢镰刀菌,为土壤处理、根腐病的早期诊断和动态监测以及三七种子、种苗流通过程中的带菌分子检测提供技术支持。

来源：2024年第S1期

《华北农学报》期刊编辑部

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