华北农学报

作者：殷冬冬, 丁祥, 兰梦蝶, 姬凯元, 王洁茹, 尹磊, 沈学怀, 戴银, 赵瑞宏, 候宏艳, 胡晓苗, 潘孝成

单位：1 安徽省农业科学院 畜牧兽医研究所,安徽省畜禽疫病研究中心,安徽 合肥 230001；2 畜禽产品安全工程安徽省重点实验室,安徽 合肥 230001；3 安徽农业大学 动物科技学院,安徽 合肥 230036；4 宁国市动物卫生监督所,安徽 宁国 242300

关键词：猪流行性腹泻病毒,N蛋白,噬菌体展示,纳米抗体,特性鉴定,

基金：安徽省重点研究与开发计划项目(202204c06020009); 安徽省自然科学基金项目(2308085MC102); 安徽省农业科学院科研平台项目(2024YL016); 安徽省现代农业产业技术体系(AHCYJXTX-05-13)

由猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的高度接触性胃肠道传染病对我国养猪业造成巨大的经济损失。为建立PEDV抗体检测方法及N蛋白的功能研究奠定基础,通过噬菌体展示技术针对PEDV N蛋白进行筛选获得其特异性的纳米抗体(Nb)。利用前期制备的N蛋白免疫羊驼,采集其外周血并分离淋巴细胞,提取细胞总RNA,反转录为cDNA,通过PCR扩增重链抗体重链可变区(VHH),插入pCANTAB5E-ccdb载体,电转化至ER2738感受态细胞,构建VHH噬菌体展示文库;随后,以PEDV N蛋白作为靶向蛋白,对文库进行4轮淘选获得阳性噬菌体,将其克隆至pET-30a 载体,表达纯化后通过间接ELISA、Western Blot鉴定Nb的结合力和特异性。结果显示,羊驼经5次免疫后,抗体效价达到1∶25 600。构建的噬菌体展示文库库容为4.72×108,丰度为4.3×1010 cfu/mL,阳性率为93.75%。经过4轮筛选,获得16株氨基酸序列不同的Nb,随后验证了Nb45与PEDV N蛋白具有良好特异性和结合能力。研究筛选获得了PEDV N蛋白特异性Nb,为PEDV检测方法的建立和基础研究提供生物材料。

来源：2024年第6期

《华北农学报》期刊编辑部

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