华北农学报

作者：谢立兰, 尹杰, 黄冬蛾, 李么明

单位：1 湖北理工学院 医学院,湖北 黄石 435003；2 湖北省病毒载体工程技术研究中心,湖北 武汉 430415；3 武汉生物工程学院 应用生物技术研究中心,湖北 武汉 430415

关键词：猪传染性胃肠炎病毒,DEAD-box解旋酶21,宿主蛋白,病毒复制,

基金：国家自然科学基金项目(31972692); 武汉生物工程学院科技创新培育基金项目(2018KP07); 湖北理工学院校级科研项目(24xjz31R)

旨在探究DEAD-box解旋酶21(DDX21)对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)复制的调控作用。首先通过蛋白免疫印迹(Western Blot)分析了TGEV 感染对 DDX21表达的影响;进一步构建了猪DDX21真核表达质粒以及建立稳定敲低DDX21的PK-15细胞系,运用荧光定量PCR(RT-qPCR)、蛋白免疫印迹、间接免疫荧光(IFA)和半数细胞培养物感染量(TCID50)探究外源过表达DDX21及敲低 DDX21 对 TGEV体外复制的调控作用;构建一系列DDX21截短突变体真核表达质粒,鉴定了DDX21调控TGEV增殖的关键功能域。Western Blot分析显示,在TGEV WH-1株感染早期,PK-15细胞内源性DDX21蛋白的表达水平显著上调; RT-qPCR、Western Blot、IFA和TCID50试验显示,超表达DDX21可以显著提高TGEV N 基因的mRNA水平、N蛋白的表达及病毒滴度,且呈剂量依赖性,其601—784 aa区域是其影响TGEV复制的关键;与阴性对照相比,在相应DDX21敲低细胞系中TGEV的增殖显著被抑制,而回补试验逆转了DDX21敲低细胞系中TGEV的滴度。该研究首次揭示了猪DDX21对TGEV增殖的促进作用并鉴定了其调控TGEV复制的关键结构域,为今后研究DDX21蛋白的功能及TGEV的致病机理提供了理论依据。

来源：2024年第4期

《华北农学报》期刊编辑部

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