华北农学报

作者：郑鑫鑫, 张艳, 解美霞, 张冬梅, 吴立强, 王省芬, 杨君

单位：河北农业大学,河北省棉花产业协同创新中心,华北作物改良与调控国家重点实验室,河北 保定 071001

关键词：陆地棉,黄萎病,酵母双杂交,互作蛋白,筛选,

基金：河北省自然科学基金项目(C2022204001); 河北省现代农业产业技术体系专项资金(HBCT2024100201)

研究发现陆地棉ENODL6基因具有抗黄萎病功能。为进一步揭示其在棉花抗黄萎病过程中发挥的作用,通过Nimble Cloning技术将GhENODL6插入酵母表达载体pNC-GBKT7,构建了重组质粒pNC-GBKT7-ENODL6。重组质粒转入酵母菌Y2HGold后可在DDO培养基上正常生长,但不能生长于QDO/X/A培养基,表明GhENODL6蛋白对酵母宿主无毒害作用,没有自激活活性。将携带pNC-GBKT7-ENODL6诱饵载体的Y2HGold酵母菌与cDNA文库进行杂交筛选,结果获得一个能够显示蓝色的菌落。通过PCR扩增,在蓝色酵母菌中获得一段526 bp的非载体插入片段,与陆地棉基因组内基因WRKY47序列高度一致。通过同源扩增,从陆地棉中克隆到WRKY47开放读码框,全长1 587 bp,编码528个氨基酸残基。再次利用酵母双杂交技术确认了WRKY47与GhENODL6之间存在互作关系。综上,构建了重组载体pNC-GBKT7-ENODL6,并鉴定到与GhENODL6互作的蛋白WRKY47。

来源：2024年第3期

《华北农学报》期刊编辑部

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