华北农学报

作者：张玉倩, 李长乐, 吕志航, 姚鑫炎, 张雪莲

单位：1 佛山科学技术学院 生命科学与工程学院,广东 佛山 528231；2 德州市农业农村局,山东 德州 253000

关键词：禽戊型肝炎病毒,多克隆抗体,原核表达,免疫,ORF3蛋白,

基金：广东省基础与应用基础研究基金项目(2022A1515012194); 广东省教育厅普通高校重点领域专项(乡村振兴)(2020ZDZX1004)

旨在对禽戊型肝炎病毒的ORF3蛋白进行原核表达,并制备其多克隆抗体,为进一步研究aHEV ORF3蛋白生物学功能新型疫苗提供生物材料。通过RT-PCR方法扩增CaHEV-GDSZ01株ORF3基因,连接pET-32a(+)表达载体以构建重组原核表达质粒,并转化BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达;利用SDS-PAGE凝胶电泳分析ORF3蛋白的表达形式后进行纯化,并免疫新西兰白兔以获得兔抗ORF3蛋白多克隆抗体,利用间接ELISA试验检测多克隆抗体的效价,利用Western Blot试验和间接免疫荧光试验(IFA)检测多克隆抗体特异性。结果显示,成功构建了pET-32a-ORF3重组原核表达质粒,并通过原核表达系统成功诱导表达了27 ku不可溶性的aHEV ORF3重组蛋白;Western Blot试验和IFA试验结果显示,制备的多克隆抗体可以特异性识别ORF3蛋白,ELISA结果显示,多克隆抗体效价为1∶51 200。成功表达CaHEV-GDSZ01株的ORF3蛋白,并制备了其多克隆抗体。

来源：2024年第3期

《华北农学报》期刊编辑部

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