华北农学报

作者：李晨宇, 足木热木·吐尔逊, 李晓荣, 杨洋, 李波, 于月华

单位：1 新疆农业大学 农学院,新疆 乌鲁木齐 830052；2 新疆农业科学院 核技术生物技术研究所,新疆 乌鲁木齐 830091

关键词：陆地棉,<i>GhMYB42</i>,克隆,序列分析,原核表达,

基金：新疆维吾尔自治区现代农业产业技术体系棉花质量安全与营养品质评价岗位科学家项目(XJARS-3); 新疆维吾尔自治区杰出青年基金项目(2022D01E57); 新疆农业科学院农业科技创新稳定支持专项(xjnkywdzc-2022001-1)

MYB转录因子对棉花的生长发育起到重要作用,而GhMYB42为MYB家族之一的转录因子同样具有一定的研究价值,因此,从棉花中克隆了GhMYB42基因的编码序列,并构建了原核表达载体。利用生物信息学方法对GhMYB42的核苷酸序列及氨基酸序列进行了分析,通过Gataway BP和LR反应,将GhMYB42基因的编码序列构建到原核表达载体pGEX-4T-1上,通过设置不同的IPTG诱导条件来确定IPTG诱导蛋白的最佳条件,最后利用Western Blot鉴定重组蛋白。结果显示,GhMYB42(XP_016732693.1)全长序列1 508 bp,编码区长792 bp,编码263个氨基酸,预测分子量约为29.534 ku,等电点为5.18。氨基酸序列比对分析发现,MYB转录因子的序列相似率为80.62%,且GhMYB42蛋白N末端含有2个串联的SANT结构域,是一个R2R3转录因子。进化树分析结果显示,陆地棉MYB42蛋白与陆地棉中另一MYB蛋白(XP_012439547.1)相似性最高并在一个分支上。蛋白诱导时由于各个试验梯度结果差别不明显,因此,选择的条件为IPTG的终浓度0.2 mmol/L,温度37 ℃,时间3 h,蛋白溶解的温度和时间为37 ℃诱导3 h。Western Blot结果表明,重组蛋白的大小正确,最终成功获得了大小为55.54 ku的GhMYB42重组蛋白,后续将对该重组蛋白进行纯化及深入研究转录因子GhMYB42的功能。

来源：2024年第1期

《华北农学报》期刊编辑部

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