华北农学报

作者：胡世享, 叶玲玲, 肖妍, 卓娜, 王滕芬, 汪琳, 蒲静, 陈培富, 艾军

单位：1 云南农业大学,云南 昆明 651000；2 昆明海关技术中心,云南 昆明 651000；3 天津海关动植物与食品检测中心,天津 300041；4 中国海关科学技术研究中心,北京 100026

关键词：赤羽病,单克隆抗体,竞争ELISA,

基金：国家重点研发计划课题(2022YFC2601605)

为建立一种用于快速检测赤羽病病毒抗体的竞争ELISA法。用AKV病毒免疫Balb/C小鼠,将其脾细胞与 SP2/0细胞进行免疫融合,以获得抗AKV的单克隆抗体;利用Bac-to-Bac杆状病毒表达的SBV N蛋白作为诊断特异性抗原,山羊抗鼠 HRP-IgG为二抗,建立并优化AKV抗体检测的竞争 ELISA方法。得到一株持续稳定繁殖的能够分泌单抗AKV核蛋白抗体的杂交瘤细胞株,单抗亚型鉴定为:重链IgG1,轻链kappa,仅能与AKV病毒呈阳性反应,与BTV、FAMD、EHDV病毒等病毒抗原不发生特异性反应;建立的检测AKV抗体ELISA检测方法,诊断抗原最佳包被浓度为0.5 μg/mL,1∶1 000抗体稀释比,1∶50血清稀释比,1∶2 000二抗稀释比,封闭条件为 5% BSA,37 ℃封闭 2 h,确定了血清抑制率大于等于44%时为阳性,小于44%为阴性;所建立的ELISA方法敏感性和特异性鉴定结果与ID Screen AKV Competition 检测试剂盒一致。本试验成功制备出一株分泌针对AKV N蛋白的杂交瘤细胞系,建立的ELISA检测方法能够用于检测动物AKV抗体,为进一步开展AKV抗体诊断试剂工艺研究、产业化奠定了基础。

来源：2023年第S1期

《华北农学报》期刊编辑部

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