华北农学报

作者：蔡诚诚, 李罗品, 温和, 刘石锋, 王强, 李立芹, 王西瑶

单位：1 西南作物基因资源发掘与利用国家重点实验室,四川 成都 611130；2 四川农业大学 农学院,四川 成都 611130

关键词：马铃薯,蔗糖磷酸合成酶,StSPS1,原核表达,多克隆抗体制备,

基金：西南作物基因资源发掘与利用国家重点实验室“生物育种”揭榜挂帅项目(SKL-ZY202203); 国家现代农业产业技术体系四川薯类创新团队项目(sccxtd-2023-09)

为了对马铃薯蔗糖磷酸合成酶(SPS)编码蛋白StSPS1进行原核表达及多克隆抗体制备。从四倍体马铃薯品种川芋10号的块茎中克隆出了StSPS1基因,该基因编码区全长为3 165 bp,编码蛋白的长度为1 055 aa。随后基于构建的His标签融合表达载体PET30a-StSPS1,进行了StSPS1蛋白的诱导、变性、纯化、复性及兔免疫试验。结果发现,StSPS1蛋白分子量约为119.62 ku,在可溶性上清中的表达极少,主要在不溶的沉淀中表达,最佳的诱导条件为37 ℃下用0.5或1.0 mmol/L的IPTG诱导4 h。由于StSPS1为包涵体蛋白,故对其进行包涵体变性处理,并利用His标签纯化出了与目的条带大小相符的蛋白,同时通过His抗体进行了蛋白质免疫印迹(WB)试验,发现在119.62 ku处检测到目标条带,说明StSPS1包涵体蛋白纯化成功。最后,通过将透析复性后的StSPS1蛋白注射进兔子皮下组织中,成功免疫出2个StSPS1的抗体,经过WB鉴定发现2个抗体均能在抗原和川芋10号叶片的总蛋白中杂出目标条带。综上,对马铃薯StSPS1蛋白进行了诱导及纯化,并成功制备了StSPS1蛋白的兔多克隆抗体。

来源：2023年第6期

《华北农学报》期刊编辑部

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