华北农学报

作者：张元臣, 胡梦杰, 薛爽, 郭文军, 沈红, 王景顺

单位：1 安阳工学院 生物与食品工程学院,河南 安阳 455000；2 河南省太行山林业有害生物野外科学观测研究站,河南 林州 456550；3 河南省安阳市殷都区自然资源局,河南 安阳 455000；4 洛阳市森林病虫害防治检疫站,河南 洛阳 471000

关键词：黏虫,抗菌肽,<i>Diapausin</i>基因,基因克隆,原核表达,

基金：国家青年自然科学基金项目(31802007); 河南省教育厅高校重点项目(22B220001); 安阳工学院博士后科研启动基金(BSH2020006)

利用反转录PCR(RT-PCR)和末端快速扩增(RACE)技术从三龄黏虫体内获得新型抗菌肽Diapausin基因的全长序列,利用生物信息学软件对该序列进行分析,并用原核表达体系对其进行诱导表达,为探究该基因的结构和功能提供理论参考。结果表明,成功克隆到了黏虫新型抗菌肽Diapausin基因,命名为Mysdiap (GenBank登录号:AZJ51075)。该基因全长537 bp,其中5'端和3'端非编码区分别为63,279 bp,开放阅读框全长195 bp,编码64个氨基酸残基,预测蛋白质分子质量为7.13 ku,等电点为5.59。Mysdiap的N端前24个氨基酸残基为信号肽序列。多重联配结果表明,Mysdiap氨基酸序列中具有高度保守区域ECCRAHG。成功构建了pET-Mysdiap重组表达质粒,并在大肠杆菌中用IPTG诱导其表达,表达的重组蛋白分子质量在20 ku左右,以包涵体和可溶性蛋白形式存在。综上,从黏虫中克隆获得了新型抗菌肽基因Mysdiap的全长序列,并在大肠杆菌中成功诱导其表达。

来源：2023年第6期

《华北农学报》期刊编辑部

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