华北农学报

作者：官萌娇, 孙旭杰, 夏卓林, 任爱芝, 赵培宝

单位：聊城大学 农学与农业工程学院,山东 聊城 252000

关键词：长枝木霉菌,非核糖体肽合成酶,启动子,

基金：山东省自然基金(ZR2020MC125); 山东省自然基金(ZR2013CM006); 山东省科技厅重点研发(2019GNC106018); 山东省农业微生物重点实验开放课题(SDKL2017015)

Peptaibols是由真菌非核糖体肽合成酶(NRPS)合成的多肽抗菌素,能够抑制多种病原菌,促进植物生长和诱导细胞凋亡。为了深入探究木霉菌非核糖体肽类抗菌素合成的调控机制,为通过基因工程来提高Peptaibols产量提供帮助。通过设计引物,克隆长枝木霉菌非核糖体肽合成酶基因NP249 的上游启动子区域,然后构建到一个具有绿色荧光蛋白基因(GFP)融合表达载体,验证基因NP249的启动子。以长枝木霉菌总DNA为模板,使用引物249-1B和249-4X,通过PCR技术扩增克隆到了NRPS的启动区域,全长1 204 bp。通过启动子NP249替代载体上GFP启动子,分别用BamH Ⅰ和XmaⅠ酶切pCX-62载体和启动子片段,T4连接酶连接,构建GFP融合载体pCX-62-NP249-GFP。通过限制性内切酶介导的转化技术转化(REMI)木霉菌原生质体,得到的转化子转到含潮霉素的培养基上进行筛选,得到潮霉素抗性转化子Z249,进一步通过荧光显微镜检测转化子,转化子Z249能检测到GFP荧光。克隆到的启动子能启动GFP表达,具备启动子功能。

来源：2023年第3期

《华北农学报》期刊编辑部

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