华北农学报

作者：王莹, 王晓宇, 孙德慧, 霍红雁, 刘海臣, 徐惠, 张继星

单位：内蒙古民族大学 生命科学与食品学院,内蒙古 通辽 028000

关键词：蓖麻,钙依赖蛋白激酶,基因克隆,生物信息学分析,表达载体,

基金：国家自然科学基金项目(31760399); 国家自然科学基金项目(32060493); 内蒙古自治区研究生科研创新资助项目(S20210283Z); 内蒙古自治区研究生科研创新资助项目(SZ2020139); 内蒙古自治区2020年度人才开发基金个人项目(nmgrcjj20200616); 内蒙古民族大学研究生科研创新资助项目(NMDSS2147); 内蒙古民族大学研究生科研创新资助项目(NMDSS2152)

为探讨蓖麻钙依赖蛋白激酶29基因(RcCDPK29)在蓖麻耐盐中的作用,以蓖麻叶片为材料,设计特异性引物,克隆蓖麻钙依赖蛋白激酶29基因(RcCDPK29),并对所得序列进行生物信息学分析。结果表明,蓖麻钙依赖蛋白激酶29基因(RcCDPK29)序列全长1 590 bp;编码528个氨基酸;蛋白分子量为59.74 ku;等电点(pI)值6.21;是典型的非跨膜蛋白;亲水性数值为负值,属于亲水性蛋白;RcCDPK29蛋白α-螺旋占比最高有228个;RcCDPK29与拟南芥CDPK(SMTL ID: 3q5i.1)相似度为40.41%,具有较高可信度(>30%)。将木薯、麻枫树、巴西橡胶树、柑橘、石榴、毛果杨与蓖麻RcCDPK29氨基酸序列进行同源性比对。其中,与麻枫树的同源性最高,为82.29%。RcCDPK29蛋白包含1个Ser/Thr蛋白激酶催化结构域和4个与Ca2+结合的EF-hand型结构域。通过qRT-PCR技术,分析RcCDPK29在不同水平盐胁迫下蓖麻不同组织中的表达,结果表明,RcCDPK29基因主要在茎中表达,盐处理12 h表达量最高。随着盐处理时间的延长,RcCDPK29基因根的表达量逐渐下降,分别在2,8,24 h达到最低,与0 h差异显著;叶的表达量在2 h的表达量最低且与0 h相比差异显著。根据RcCDPK29全长设计带有Sma Ⅰ和Xba Ⅰ酶切位点的引物扩增出序列全长,用Sma Ⅰ和Xba Ⅰ进行双酶切后与表达载体 pCG-3300连接。成功构建了CRcCDPK29的表达载体。因此,RcCDPK29在蓖麻受到盐胁迫时起重要作用。

来源：2023年第2期

《华北农学报》期刊编辑部

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