华北农学报

作者：肖士奎, 李芳, 张文婷, 吕淑芳, 史国安, 吴疆, 范丙友

单位：1 河南科技大学 农学院,河南 洛阳 471023；2 中机十院国际工程有限公司,河南 洛阳 471003；3 榆林学院 信息工程学院,陕西 榆林 719000

关键词：芍药,<i>PlACS</i>,基因克隆,序列分析,原核表达,

基金：国家重点研发计划(2018YFD1000400); 国家自然科学基金(U1204323); 河南省高等学校重点科研项目(20A210010)

为了研究芍药ACS基因的功能,应用RACE技术从芍药切花品种桃花飞雪中克隆了PlACS基因cDNA序列,利用生物信息学方法对其编码的蛋白质进行了综合分析;以pET32a为骨架,构建了PlACS基因的原核表达载体,建立了PlACS蛋白高效的原核表达体系。结果表明,PlACS cDNA全长1 752 bp(GenBank登录号JX512359),共编码492个氨基酸,具有7个保守结构域及活性位点K278;分子进化分析表明,PlACS和牡丹ACS亲缘关系最近;二级结构预测发现,PlACS蛋白由α-螺旋、β-折叠、β-转角和无规则卷曲组成,四者比例分别为40.04%,16.26%,6.91%和36.79%;同源建模显示,PlACS蛋白以同源二聚体形式存在。PlACS蛋白最佳诱导表达条件为基因工程菌菌体密度A600达0.2时,在菌液中加入终浓度为0.1 mmol/L的IPTG,在37 ℃诱导2 h。PlACS重组蛋白高效原核表达体系为后续通过变复性获得有生物学活性的PlACS蛋白及其酶学功能鉴定奠定基础。

来源：2022年第5期

《华北农学报》期刊编辑部

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