华北农学报

作者：王亚男, 梁岩岩, 严文培, 张银萍, 李强, 吴秀菊

单位：东北农业大学 生命科学学院,黑龙江 哈尔滨 150030

关键词：北细辛,<i>AhOMT1</i>,基因克隆,生物信息学分析,原核表达,

基金：国家基础科学人才培养基金能力培养与科研训练项目(J1210069); 黑龙江省教育厅科学技术研究计划(12531030); 哈尔滨市科技局科技创新人才专项(2012RFLXN003)

为进一步挖掘甲基丁香酚合成相关酶基因,解析北细辛次生代谢途径,根据北细辛转录组数据库信息,筛选和克隆了AhOMT1基因,并进行了相应的生物信息学分析及原核表达分析。结果表明,AhOMT1基因包含的开放阅读框为1 089 bp,编码362个氨基酸,理论分子质量为40.23 ku,等电点为5.34,AhOMT1蛋白为亲水性蛋白,无跨膜结构,无信号肽序列;AhOMT1基因具有二聚化结构域与甲基转移酶结构域,AhOMT1与催化类黄酮、丁香酚类化合物的O-甲基转移酶的同源性较高;构建pET-32b-AhOMT1原核表达载体,成功诱导表达约60 ku的重组蛋白;确定了最佳诱导条件是0.2 mmol/L IPTG,16 ℃诱导16 h,该诱导条件下的重组蛋白多以可溶性蛋白形式存在;使用Ni2+树脂分离纯化AhOMT1蛋白,以200 mmol/L咪唑洗脱可得到最大量的蛋白。该研究首次克隆了北细辛AhOMT1基因,构建原核表达载体,筛选出AhOMT1蛋白最佳诱导条件。

来源：2022年第4期

《华北农学报》期刊编辑部

查看华北农学报杂志2022年第4期