华北农学报

作者：吉祥, 宋志成, 韦晓玲, 杨煜, 隋炯明, 郭宝太

单位：1 青岛农业大学 农学院,山东省旱作农业技术重点实验室,山东 青岛 266109；2 山东省农业科学院 蔬菜花卉研究所,山东 济南 250100

关键词：马铃薯卷叶病毒,S病毒,重组双CP,多克隆抗体,间接ELISA,DAS-ELISA,

基金：山东省现代农业(薯类)产业技术体系项目(SDAIT-16-03)

为了制备出马铃薯卷叶病毒(PLRV)与S病毒(PVS)重组双CP多克隆抗体并用于PLRV与PVS这2种病毒的间接与DAS-ELISA检测,构建了PLRV与PVS融合双CP基因的原核表达载体pET22b-LRCP/SCP,用超声破碎法代替溶菌酶法裂解重组菌BL21(pET22b-LRCP/SCP)并提取菌体蛋白,用镍离子亲和层析纯化获得了分子质量为51.2 ku的高纯度的重组双CP。用该重组双CP作抗原免疫家兔获得了高效价(1∶128 k)抗血清。纯化的重组双CP多克隆抗体与PLRV或PVS阳性标准物特异性结合,与另外4种马铃薯主要病毒(PVX、PVY、PVA与PVM)无交叉反应。间接ELISA反应中,稀释度为1∶3 200的重组双CP多克隆抗体与PLRV或PVS阳性物都呈现阳性反应;在DAS-ELISA反应中,稀释度均为1∶100的重组双CP多克隆抗体及其碱性磷酸酶标记物与PLRV或PVS的阳性标准物也分别呈现阳性反应。结果表明,制备的重组双CP抗体既可用于PLRV与PVS这2种病毒的间接ELISA检测,也可用于DAS-ELISA检测。

来源：2022年第4期

《华北农学报》期刊编辑部

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