华北农学报

作者：郭芳睿, 刘浥, 杨柯昕, 褚美荣, 张全发, 张雅菲, 王树桐, 曹克强

单位：1.河北农业大学 植物保护学院,河北 保定 071001；2.廊坊市动物卫生监督所,河北 廊坊 065000

关键词：尖孢镰刀菌,T-DNA插入突变体,Southern杂交,TAIL-PCR,致病力,

基金：国家重点研发计划(2016YFD0201100); 国家苹果产业技术体系(CARS-27); 河北省农业高质量发展关键共性技术攻关专项(19226508D); 河北农业大学大学生创新创业训练计划资助项目(s202110086014)

在建立T-DNA插入突变体库的基础上,为筛选出致病力明显下降的突变体并明确其插入位点信息,对突变体的培养表型和致病性差异进行测试,研究结果为进一步阐明尖孢镰刀菌致病分子机制奠定基础。在前期构建的T-DNA插入突变体库中,采用PCR检测筛选了300株T-DNA插入突变体,观察和测定菌落形态、生长速率、产孢量、遗传稳定性等生物学性状,用海棠胚根接种法比较突变体致病力差异,对筛选到的致病力明显减弱的突变体进行插入位点侧翼序列分析及Southern杂交分析。结果显示,283个供试突变体都已插入目的基因,并伴有绿色荧光。将T-DNA插入突变体连续转接培养5代后,在含潮霉素B的培养基上能稳定遗传,且菌落形态和颜色无明显改变;在对283株突变体进行致病性测定中,87.9%的突变菌株致病力减弱,在致病力减弱的突变体中,HS2-520、HS2-1016和HS2-2109几乎丧失了致病性。选取8株致病力明显减弱的突变体进行Southern杂交分析,结果显示,其中6株突变体为单拷贝插入菌株,1株为双拷贝插入菌株。对这8株突变体进行了TAIL-PCR侧翼序列扩增,经公司测序,与野生菌株HS2基因组序列比对后获得12条侧翼序列,明确了其中3条侧翼序列为尖孢镰刀菌序列。获得致病力明显减弱的单拷贝插入突变体6株,明确了其中2株突变体的插入位点侧翼序列信息。

来源：2022年第3期

《华北农学报》期刊编辑部

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