华北农学报

作者：范会芬, 孙天杰, 苏伟华, 肖付明, 张洁, 王冬梅

单位：1. 省部共建华北作物改良与调控国家重点实验室, 河北农业大学 生命科学学院, 河北省植物生理与分子病理学重点实验室, 河北 保定 071001;；2. 河北省邯郸市农业科学院, 河北 邯郸 056001

关键词：大豆,GmWRKY50,原核表达,蛋白纯化,Western Blotting,

基金：河北省现代农业产业技术体系创新团队建设大豆产业创新团队（326-0702-JSNTKSF）；河北省自然科学基金（C2020204132）；河北省科技厅现代种业科技创新专项子课题（21326313D-1）

为阐明GmWRKY50转录因子在大豆与大豆花叶病毒（SMV）互作过程中的作用机制，以大豆叶片的RNA为模板，利用PCR技术克隆了GmWRKY50基因的编码区全长，利用MEGA 7.0软件对不同物种中GmWRKY50的相似氨基酸序列进行比对并进行系统进化树分析，通过原核表达技术，构建pColdⅡ-GmWRKY50重组质粒，转化大肠杆菌BL21后，利用IPTG对带有His标签的GmWRKY50重组蛋白进行诱导，经Ni-NTA柱对重组蛋白进行纯化，收集纯化后的重组蛋白进行多克隆抗体的制备，通过Western Blotting检测GmWRKY50在SMV侵染前后的表达水平变化。结果表明，GmWRKY50基因的CDS全长为495 bp，编码165个氨基酸，在N端含有一个WRKY结构域，属于WRKY DNA-binding结构域蛋白。序列比对及系统进化树分析表明，大豆GmWRKY50与拟南芥AtWRKY50同源关系最近；IPTG浓度为0.5 mmol/L，诱导时间为4 h，重组蛋白的诱导效果良好，利用镍离子亲和纯化获得与His蛋白标签融合的目的蛋白，具有较高的可溶性。以融合蛋白为抗原制备的多克隆抗体可以特异性结合GmWRKY50蛋白，GmWRKY50蛋白在不亲和组合中受SMV侵染诱导而上调表达，为进一步研究转录因子GmWRKY50在大豆抵御SMV侵染过程中的功能奠定了基础。

来源：2021年第6期

《华北农学报》期刊编辑部

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