华北农学报

作者：韩凯凯, 严若峰, 刘青涛, 刘宇卓, 李银, 赵冬敏, 黄欣梅, 章丽娇, 杨婧, 付晨

单位：1. 南京农业大学 动物医学院, 江苏 南京 210095;；2. 江苏省农业科学院 兽医研究所, 江苏 南京 210014;；3. 江苏大学 生命科学学院, 江苏 镇江 212013

关键词：鸭坦布苏病毒,RNA依赖RNA聚合酶,生物信息学,

基金：江苏省农业科技自主创新资金项目（cx（20）3093）；国家自然科学基金（31502101）

旨在对鸭坦布苏病毒NS5蛋白功能基团RNA依赖RNA聚合酶进行真核表达，同时对其蛋白结构和功能进行生物信息学分析。首先查找GenBank数据库中收录的DTMUV基因序列，以RdRp基因为研究对象，通过软件设计并合成特异性引物，RT-PCR技术扩增RdRp基因，回收PCR产物并与pCMV-N-Flag真核表达载体相连接，构建真核表达质粒pCMV-Flag-RdRp ，将测序无误的质粒转染至BHK-21细胞，通过Western Blot和间接免疫荧光技术检测该蛋白在BHK-21细胞内的表达。同时针对RdRp蛋白，利用生物信息学软件进行序列分析、结构解析及功能预测。通过PCR方法成功扩增RdRp基因，构建的真核表达质粒pCMV-Flag-RdRp经双酶切鉴定证明正确，进一步通过间接免疫荧光技术与Western Blot检测发现，重组质粒pCMV-Flag-RdRp在BHK-21细胞内正常表达，生物信息学分析发现，RdRp蛋白编码606个氨基酸，分子式为C3091H4810N870O894S41，编码蛋白亲水性平均系数为-0.536，不稳定指数为42.15，含有丰富的磷酸化位点及O-糖基化位点。其二级结构包含46.37%的α-螺旋、12.54%的延伸链以及35.31%的无规则卷曲。上述结果为进一步研究坦布苏病毒致病性打下了基础。

来源：2021年第6期

《华北农学报》期刊编辑部

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