华北农学报

作者：徐欢, 段盛文, 冯湘沅, 郑科, 杨琦, 汪启明, 成莉凤, 彭源德

单位：1. 中国农业科学院 麻类研究所, 湖南 长沙 410205;；2. 湖南农业大学 生物科学技术学院, 湖南 长沙 410128

关键词：苎麻,生物脱胶,果胶裂解酶,原核表达,生物信息学,

基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项（1610242021002）；湖南省自然科学基金（2019JJ40332；2019JJ50711）；国家创新工程（ASTIP-IBFC08）；国家现代农业产业技术体系建设专项（CARS-16-E22）；湖南省重点领域研发计划（2019NK2071）；长沙市科技计划项目（kq1901112）

为使苎麻生物脱胶果胶裂解酶PelG403高效表达。将pelG403从重组质粒pEASY-Blunt E1-G403更换至质粒拷贝数更高的pET28a载体中，导入Escherichia coli BL21（DE3）后进行诱导表达。采用DNS法进行酶活力测定，通过SDS-PAGE和Western Blot分析检验PelG403表达效果，并对其序列进行分析鉴定。结果表明：pET28a-G403/BL21的果胶裂解酶活力为335.8 U/mL，较pEASY-Blunt E1-G403/BL21提高了3.05倍；工程菌pET28a-G403/BL21表达产物分子量比预测带His标签的融合蛋白分子量（43.6 ku）略小；PelG403含387个氨基酸，N末端前35个氨基酸为信号肽；理论pI值为7.64，有4个半胱氨酸，不稳定系数为27.42；其蛋白结构域含有典型的右手β-螺旋结构，属于Pec lyase C家族。因此，将pelG403从重组质粒pEASY-Blunt E1-G403更换至pET28a载体中，并导入E.coli BL21（DE3）进行诱导表达，是苎麻脱胶果胶裂解酶基因pelG403高效表达的方法和途径，同时对其序列进行分析鉴定，为果胶裂解酶的纯化、关键位点分析、分子改造及其脱胶功能特性研究奠定基础。

来源：2021年第5期

《华北农学报》期刊编辑部

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