华北农学报

作者：雷其冬, 孙旭东, 徐慧妮

单位：1. 昆明理工大学 生命科学与技术学院, 云南 昆明 650500;；2. 中国科学院 昆明植物研究所, 云南 昆明 650201

关键词：拟南芥,转录因子,TCP,基因克隆,原核表达,蛋白纯化,

基金：国家自然科学基金项目（31760582）

为进一步研究转录因子TCP4在植物生长发育过程中的调控作用和下游靶基因。利用生物信息学分析转录因子TCP4家族及其蛋白序列，扩增AtTCP4基因CDS序列、构建原核表达载体并诱导纯化获得蛋白，利用凝胶电泳迁移试验（EMSA）验证AtTCP4蛋白与拟南芥功能基因LOX2启动子区域的顺式作用元件结合。生物信息学分析表明，拟南芥TCP蛋白含有非典型的螺旋-环-螺旋（bHLH）结构域；系统进化树表明，AtTCP4属于Ⅱ类TCP蛋白；蛋白三级结构预测表明：转录因子TCP4可以形成同源或异源二聚体。特异性引物扩增获得AtTCP4基因的CDS序列，其开放阅读框（ORF）长为1 263 bp。构建原核表达载体pET-28a-AtTCP4并转化到Rosetta （DE3）感受态中，经IPTG诱导、纯化和Western Blot检测证明获得AtTCP4蛋白。EMSA试验验证AtTCP4蛋白能够结合到功能基因LOX2的顺式作用元件。转录因子TCP4结合功能基因LOX2启动子区域，影响植物激素茉莉酸的生物合成，调控植物的生长发育过程。

来源：2021年第5期

《华北农学报》期刊编辑部

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