华北农学报

作者：于天飞, 谢鹏宇, 孙婉姝, 李静, 尹海畅, 黎明, 于志丹

单位：1. 齐齐哈尔大学 生命科学与农林学院, 黑龙江 齐齐哈尔 161006;；2. 黑龙江省抗性基因工程与寒地生物多样性保护重点实验室, 黑龙江 齐齐哈尔 161006;；3. 齐齐哈尔大学 计算机与控制工程学院, 黑龙江 齐齐哈尔 161006

关键词：鹅细小病毒,非结构蛋白,单克隆抗体,抗体可变区,原核表达,

基金：黑龙江省自然科学基金（LH2020C110）；黑龙江省省属高等学校基本科研业务费（135309344）；黑龙江省省属高等学校基本科研业务费特色学科专项（YSTSXK201881）；黑龙江省领军人才梯队后备带头人资助

为了在大肠杆菌中表达抗鹅细小病毒（GPV） NS1蛋白单克隆抗体轻链可变区（VL）和重链可变区（VH）基因，并测定其与NS1蛋白结合活性。对抗GPV NS1蛋白单克隆抗体VL、VH基因核苷酸序列依据大肠杆菌偏爱密码子进行优化，人工合成获得了含有可变区基因的重组质粒pUC57-VL和pUC57-VH。然后用Bam H Ⅰ/Xho Ⅰ双酶切pUC57-VL、pUC57-VH ，回收340 bp的VL基因和370 bp的VH基因。目的基因通过Bam H Ⅰ/Xho Ⅰ多克隆位点分别插入至原核表达载体pET-32a，获得重组质粒pET-VL和pET-VH。重组质粒经Bam H Ⅰ单酶切和Bam H Ⅰ/Xho Ⅰ双酶切及测序鉴定。重组质粒分别转化大肠杆菌Rosetta （DE3），经IPTG诱导，获得了重组蛋白TRX-VL和TRX-VH的表达，分子量分别为30.3，31.4 ku。纯化后的重组蛋白能与His标签单克隆抗体发生特异性结合，鉴定结果表明，获得的纯化蛋白为目的蛋白。间接ELISA分析表明，0.4 μg的TRX-VH可与25 ng的GST-NS1蛋白特异性结合而0.4 μg的TRX-VL不能与各包被量的GST-NS1蛋白特异性结合，TRX-VH与GST-NS1蛋白的特异性结合可被1 ∶ 200稀释的GPV感染鹅血清完全阻断。

来源：2021年第5期

《华北农学报》期刊编辑部

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