华北农学报

作者：于堃, 刘瑞莉, 刘贤勋, 柏学进, 董雅娟

单位：1. 青岛农业大学 动物科技学院, 山东 青岛 266109;；2. 山东省黑牛繁育工程技术研究中心, 山东 青岛 266109;；3. 山东布莱凯特黑牛科技股份有限公司, 山东 淄博 256306

关键词：布莱凯特黑牛,鲁西黄牛,bta-miR-133a,<i>PAX7</i>,C2C12细胞,

基金：山东省现代化农业产业技术体系牛产业创新团队（6682216030）

旨在探究bta-miR-133a参与肉牛调控背最长肌发育的分子机制。通过采集布莱凯特黑牛和鲁西黄牛的背最长肌进行sRNA建库，数据筛选与肉牛骨骼肌发育相关的bta-miR-133a，采用生物信息学分析软件鉴定其保守性并预测其靶基因，对其靶基因进行GO富集分析和KEGG通路富集分析，并通过双荧光素酶报告试验对预测的潜在靶基因进行验证；选取C2C12细胞进行功能验证，过表达和敲除bta-miR-133a，48 h后2%马血清诱导观察肌管分化过程，CCK-8检测细胞增殖率，实时荧光定量PCR检测细胞增殖分化标记基因PCNA、CCND1、Myh1、Myod1以及靶基因的表达量。结果表明，bta-miR-133a的成熟序列在各物种间高度保守，靶基因预测为PAX7 ，经双荧光素酶报告试验验证，bta-miR-133a与PAX7存在靶标关系。GO富集和KEGG通路分析结果显示，预测靶基因显著富集于肌动蛋白细胞骨架组织的调节、经典Wnt信号通路的负调控、肌动蛋白丝结合等GO条目中和MAPK、Ras、FoxO等与肌肉发育相关的信号通路中。过表达bta-miR-133a促进肌管分化（P <0.01），在72 h，降低细胞的增殖率（P <0.01），抑制靶基因PAX7的表达（P <0.01）；敲除bta-miR-133a则抑制肌管分化（P <0.01），在72 h时，增加细胞的增殖率（P <0.05），促进靶基因PAX7表达（P <0.01）。在细胞增殖方面，过表达bta-miR-133a降低其标记基因PCNA、CCND1的表达量（P <0.05），敲除组则相反；在细胞分化方面，过表达bta-miR-133a增加其标记基因Myh1、Myod1的表达量（P <0.01），敲除组则相反。综上表明，bta-miR-133a可能通过靶向负调控PAX7的表达抑制成肌细胞增殖、促进其分化而参与背最长肌的发育过程。

来源：2021年第5期

《华北农学报》期刊编辑部

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