华北农学报

作者：李陆萍, 邓竹英, 汪志鹏, 梁大成

单位：1. 湖北省主要粮食作物产业化协同创新中心, 湖北 荆州 434025;；2. 长江大学湿地生态与农业利用教育部工程研究中心, 湖北省涝渍灾害与湿地农业重点实验室, 湖北 荆州 434025

关键词：可移动性RNA,SL24,MS2,MS2-GFP,

基金：国家自然科学基金项目（31671257）

为了方便快速地鉴定RNA的移动性，研究RNA参与植物生长发育以及生理响应过程的胞间运输机制，减少试验成本，将含有24个茎环串联重复的RNA结构（SL24）连入双元载体pUbiK成功构建了表达载体pSL24UbiK，再利用同源重组的方法将可移动性RNA FT和不可移动性RNA GUS片段分别连入表达载体pSL24UbiK成功构建了重组载体pSL24UbiK-FT、pSL24UbiK-GUS。利用农杆菌介导法，将pSL24UbiK-FT、pSL24UbiK-GUS分别与p1390-35S-MS2FD-GFP共同在烟草叶片中瞬时表达。在Ubiquitin启动子驱动下，SL24和目标RNA形成融合片段。MS2/SL24系统的另一组分MS2蛋白与绿色荧光蛋白融合形成MS2-GFP，噬菌体外壳蛋白MS2可识别SL24 RNA结构，在共聚焦显微镜下观察烟草叶片中GFP的细胞定位情况。结果显示，可移动RNA FT在细胞质附近显示出点状信号，不可移动RNA GUS在细胞质附近没有检测到荧光信号，只在细胞核位置有荧光信号的出现。结果表明，利用该系统将目标RNA连接到表达载体pSL24UbiK上，通过与p1390-35S-MS2FD-GFP共侵染烟草叶片，在共聚焦显微镜下观察GFP的细胞定位情况就能够确定RNA在细胞内是否可以移动，为研究RNA的移动性提供了新的技术方法。

来源：2021年第4期

《华北农学报》期刊编辑部

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