华北农学报

作者：于天飞, 谢鹏宇, 孙婉姝, 李静, 尹海畅, 黎明, 于志丹

单位：1. 齐齐哈尔大学 生命科学与农林学院, 黑龙江 齐齐哈尔 161006;；2. 黑龙江省抗性基因工程与寒地生物多样性保护重点实验室, 黑龙江 齐齐哈尔 161006;；3. 齐齐哈尔大学 计算机与控制工程学院, 黑龙江 齐齐哈尔 161006

关键词：番鸭细小病毒,非结构蛋白,水禽真核翻译延伸因子,GST pull-down,蛋白互作,

基金：黑龙江省自然科学基金（LH2020C110）；黑龙江省省属高等学校基本科研业务费（135309344）；黑龙江省省属高等学校基本科研业务费特色学科专项（YSTSXK201881）；黑龙江省领军人才梯队后备带头人资助

旨在探讨番鸭细小病毒（MDPV）非结构蛋白NS1与水禽真核翻译延伸因子1A1（eEF1A1）之间的互作关系。根据GenBank中已发表的北京鸭和浙东白鹅eEF1A1基因序列，经大肠杆菌偏爱密码子优化，人工合成的质粒分别命名为pUC57-DeEF1A1和pUC57-GeEF1A1；对含有MDPV YL08株NS1基因的重组质粒pUC57 -NS1、pUC57-DeEF1A1和pUC57-GeEF1A1进行Ba mHⅠ和Xho Ⅰ双酶切，回收目的片段后分别插入到原核表达载体pGEX-6p-1和pET-32a中，构建了重组质粒pGEX-DeEF1A1、pET-GeEF1A1、pET-NS1和pGEX-NS1；重组质粒分别转化至大肠杆菌Rosetta（DE3），经IPTG诱导，获得了重组蛋白GST-DeEF1A1、TRX-GeEF1A1、TRX-NS1和GST-NS1的表达；采用HRP标记的GST单克隆抗体鉴定GST-DeEF1A1、HRP标记的His单克隆抗体鉴定TRX-GeEF1A1；采用HRP标记的His单克隆抗体鉴定TRX-NS1、HRP标记的GST单克隆抗体鉴定GST-NS1，采用MDPV感染番鸭血清鉴定TRX-NS1和GST-NS1的抗原性；采用GST pull-down试验验证GST-DeEF1A1与TRX-NS1、GST-NS1与TRX-GeEF1A1的互作。结果表明，获得的重组蛋白GST-DeEF1A1、TRX-GeEF1A1、TRX-NS1和GST-NS1的分子量分别为76.9，67.9，89.5，98.6 ku；GST-DeEF1A1和GST-NS1可与HRP标记的GST单克隆抗体特异性结合，TRX-GeEF1A1和TRX-NS1可与HRP标记的His单克隆抗体特异性结合；GST-NS1和TRX-NS1可与MDPV感染番鸭血清特异性结合，抗原性良好；GST pull-down试验中，GST-DeEF1A1可与TRX-NS1互作，GST-NS1不与TRX-GeEF1A1互作。本研究表明，MDPV NS1蛋白可以和北京鸭eEF1A1在体外相互作用而不能和浙东白鹅eEF1A1在体外相互作用，互作结果差异性可能与二者的102-106 aa，108 aa的氨基酸残基有关。

来源：2021年第4期

《华北农学报》期刊编辑部

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