华北农学报

作者：汪亮, 李忠秋, 唐晓东, 张海峰, 刘娣, 张冬杰

单位：1. 黑龙江省农业科学院, 黑龙江 哈尔滨 150086;；2. 农业农村部种养结合重点实验室, 黑龙江 哈尔滨 150086

关键词：猪,<i>ATP6V0A4</i>,启动子,核心区,双荧光素酶报告系统,

基金：黑龙江省杰出青年基金项目（JQ2020C005）；黑龙江省博士后基金资助项目（LBH-Z18263）

ATP6V0A4基因编码V-ATP酶的一个亚基，与H+转运相关，是遗传性远端肾小管性酸中毒的致病基因。在前期研究中发现，民猪在遭受冷应激后其背脂中ATP6V0A4基因的转录水平发生了显著上升（P<0.05）。为了分析ATP6V0A4基因在转录水平的调控机制，构建了一系列长度不同的含有该基因5'端启动子区域的双荧光素酶报告基因质粒，转染PK15细胞并检测双荧光素酶的相对活性。根据检测结果，利用重叠PCR技术定点靶序列，预判可能存在的转录调控因子。结果发现，该基因启动子区的-1 504~-1 bp片段具有转录活性，通过2轮启动子截短试验后判定-265~-1 bp区域内存在正调控元件，-581~-265 bp区域内存在负调控元件。定向缺失-205~-190 bp，-120~-110 bp小片段后，确定-205~-190 bp区域内存在调控该基因转录的正调控元件结合位点，通过在线软件预测后发现E2F3、SP2、EGR1、E2F6、CTCFL、E2F1、SP1和ETF可能是该基因的正调控转录因子。首次克隆了猪的ATP6V0A4基因的启动子区域并进行了转录因子结合位点的筛选与鉴定，为后续研究其在冷应激状态下的转录调控奠定了基础。

来源：2021年第3期

《华北农学报》期刊编辑部

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