华北农学报

作者：丁戈, 黄杨, 陈伦林, 李书宇, 宋来强, 熊洁

单位：江西省农业科学院 作物研究所, 国家油料改良中心南昌分中心, 江西省油料作物生物学重点实验室, 农业农村部长江中下游作物生理生态与耕作重点实验室, 江西 南昌 330200

关键词：甘蓝型油菜,内参基因,转录组测序,实时荧光相对定量PCR,表达稳定性分析,铝胁迫,

基金：国家自然科学基金项目（31560348）；国家油菜产业技术体系项目（CARS-12）

为了研究甘蓝型油菜在铝胁迫条件下内参基因的稳定性，在受到主要铝毒害的根组织内发掘新内参基因，以甘蓝型油菜耐铝品种赣油杂7号和铝敏感品种蓉油18的苗期根组织为研究材料，对营养液培养的试验材料分别设置对照组（0 h）和2个时间梯度（3，24 h）的铝胁迫（100 μmol/L AlCl3，pH值4.5）处理组。首先，采用有参考基因组的转录组测序技术（RNA-seq）及FPKM值差异基因表达分析，筛选出符合持家基因特征的5个候选内参基因（Actin7、ARFA1E、SAP5、UXS3、UBC9）。随后，依次进行实时荧光相对定量PCR分析，扩增曲线和熔解曲线分析，LinRegPCR扩增效率分析，geNorm、NormFinder和BestKeeper基因表达稳定性分析，REST 2009相对表达量分析等分析步骤。结果表明，新设计开发的5对候选内参基因引物特异性高。从转录组测序数据中筛选出的4个候选内参基因（Actin7、ARFA1E、SAP5、UXS3）的表达稳定性获得了验证。按表达稳定性的综合排名由高至低排序依次为UXS3、SAP5、ARFA1E、Actin7，其中最优组合为SAP5和UXS3。综上所述，本研究开发的候选内参基因引物特异性高，可以提高铝胁迫试验体系实时荧光相对定量PCR试验的准确性，新发掘的内参基因（Actin7、ARFA1E、SAP5、UXS3），可以作为铝胁迫试验体系实时荧光相对定量PCR试验的新内参基因。

来源：2021年第1期

《华北农学报》期刊编辑部

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