华北农学报

作者：胡月清, 王若仲, 黄志刚, 萧浪涛

单位：1. 宜春学院 生命科学与资源环境学院, 江西省作物生长发育调控重点实验室, 江西 宜春 336000;；2. 湖南农业大学 生物科学技术学院, 植物激素与生长发育湖南省重点实验室, 湖南 长沙 410128

关键词：马铃薯,<i>StWRKY57</i>,GST标签,序列分析,原核表达,

基金：国家自然科学基金项目（31570372）；江西省自然科学基金项目（20192BAB204012）；江西省教育厅科技项目（GJJ180843）

为了研究马铃薯WRKY57基因（PGSC transcript number PGSC0003DMT400072958）功能，通过RT-PCR克隆得到马铃薯耐旱品种PB06的StWRKY57基因cDNA序列，命名为StWRKY57-PB。利用生物信息学方法对其序列特征进行了分析；以pGEX-KG为基本骨架，构建了StWRKY57-PB蛋白的原核表达载体并在大肠杆菌中进行了表达和纯化分析。结果表明，StWRKY57-PB基因开放阅读框（ORF）长981 bp，编码蛋白属于WRKY转录因子家族Ⅱ c类，含326个氨基酸残基，含有WRKY结构域（WRKYGQK）和一个类锌指结构基序（C-X4-C-X23-H-X1-H）。序列比对及构建系统发育树结果表明，它与马铃薯基因组数据库及NCBI公布的WRKY57（XP_006348711.1）有4个氨基酸的差异，与番茄WRKY57分子距离较近，相似性为93%，与拟南芥WRKY57亲缘关系较远，相似性为57%。二级结构预测发现，StWRKY57-PB所编码蛋白由延伸链、α螺旋、β折叠和不规则卷曲组成，四者比例分别为13.50%，16.56%，7.98%，61.96%。在0.5 mmol/L IPTG诱导下，该蛋白质在3种大肠杆菌表达菌株BL21、Rosetta和Tuner中稳定表达，利用GST亲和树脂分离纯化了GST-StWRKY57-PB融合蛋白，Western Blot验证了蛋白质的表达和纯化。对进一步确定该蛋白质的体外活性及生物学功能具有重要意义。

来源：2021年第1期

《华北农学报》期刊编辑部

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