华北农学报

作者：马鸿程, 熊显荣, 王晗, 海卓, 闵星宇, 李键

单位：1. 西南民族大学 生命科学与技术学院, 四川 成都 610041;；2. 青藏高原动物遗传资源保护与 利用教育部重点实验室, 四川 成都 610041;；3. 动物科学国家民委重点实验室, 四川 成都 610041

关键词：牦牛,<i>PIK3CB</i>,组织表达,卵泡,

基金：国家“十三五”重点研发专项（2018YFD0502304）；西南民族大学中央高校基本科研业务费专项资金项目（2020PTJS15005）

旨在探讨磷脂酰肌醇-3激酶催化亚基β（Phosphoinositide-3 kinase，PI3K，catalytic subunit beta，PIK3CB/P110β）基因序列特征，比较分析其在牦牛不同发育阶段卵泡中的表达规律。通过RT-PCR技术从牦牛卵巢组织中克隆获得PIK3CB基因序列并对其进行生物信息学分析；采用RT-qPCR方法检测PIK3CB基因在牦牛不同组织中的表达水平；将采集的牦牛卵泡根据直径大小分为大（≥7 mm）、中（3.0~6.9 mm）、小（≤2.9 mm）3组，分别收集各组卵泡中的壁颗粒细胞及卵母细胞提取总RNA，采用RT-qPCR方法检测PIK3CB mRNA在各级别卵泡壁颗粒细胞及卵母细胞中的相对表达量。结果显示：克隆获得牦牛PIK3CB基因CDS区长3 213 bp，共编码1 070个氨基酸。蛋白质分析显示，PIK3CB蛋白为亲水酸性蛋白，无跨膜结构无信号肽，二级结构主要由α-螺旋和无规卷曲组成。PIK3CB核苷酸同源性及遗传进化树分析显示，牦牛与野牦牛和黄牛亲缘关系最近。PIK3CB基因在牦牛心脏、脾脏、肾脏、肌肉、肝脏、肺脏、子宫、胃、小肠、卵巢组织中均有表达，尤其在脾脏、子宫和卵巢组织中表达量显著高于其他组织（P<0.05）。RT-qPCR结果显示，PIK3CB基因在卵泡发育过程中均有表达，其中在各级别卵泡壁颗粒细胞中，mRNA表达量随着卵泡发育进程呈现上升趋势，且大、中级别卵泡中的表达量极显著高于小卵泡组（P<0.01）；但是卵母细胞中mRNA表达量差异不显著（P>0.05）。结果提示，mRNA基因参与了牦牛卵泡发育调控，是PI3K信号通路在调节颗粒细胞的功能中不可或缺的催化亚基之一，具体调控机制有待进一步研究。本研究为深入探讨PI3K-AKT信号通路在卵巢发育中的调控机理提供基础资料。

来源：2021年第1期

《华北农学报》期刊编辑部

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