华北农学报

作者：张浩, 柳絮, 宣宁, 张华, 高瑞钰, 赵倩倩, 姚方印

单位：1. 山东师范大学, 山东 济南 250014;；2. 山东省农业科学院 生物技术研究中心, 山东 济南 250100

关键词：水稻,抽穗期,基因编辑,<i>DTH8</i>,CRSPR/Cas9,

基金：国家转基因重大专项（2016ZX08001001-001-007）；山东省农业良种工程（2017LZ029；2019LZGC017；2019LZGC003）；山东省农业科学院创新工程（CXGC2016A02）；山东省自然科学基金（ZR2019BC105）；山东省现代农业产业技术体系（水稻）项目（SDAIT-17-03）

CRISPR/Cas9基因编辑技术已经成为水稻育种的重要手段。为培育早熟、丰产、优质的种质资源，以农艺性状优良、迟熟粳稻品种香糯99-25为试验材料，构建了CRISPR/Cas9双靶点表达载体对抽穗期基因DTH8进行编辑，采用农杆菌介导法将构建好的表达载体转化农杆菌EHA105。用携带重组质粒的农杆菌菌液侵染水稻愈伤组织，成功获得了30株T0转基因苗。对T0植株利用潮霉素特异引物进行分子检测，其中阳性植株29株，阳性率高达96.7%。设计特异性引物对29株阳性苗的靶位点上下游600 bp进行PCR扩增测序，结果表明，7株转基因阳性苗在第2个靶点附近发生了碱基替换或插入突变。对这7株突变株系的抽穗期进行调查，发现DTH8-2、DTH8-5、DTH8-9、DTH8-10、DTH8-17、DTH8-21的抽穗期提前。利用实时荧光定量PCR检测发现DTH8-2、DTH8-9、DTH8-17与香糯99-25相比DTH8基因表达显著降低。成功利用CRISPR/Cas9基因编辑技术对香糯99-25的DTH8基因进行了编辑，获得了抽穗期提前的DTH8突变体材料，为培育早熟、丰产、优质的水稻品种提供了种质资源。

来源：2020年第6期

《华北农学报》期刊编辑部

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