华北农学报

作者：刘东, 兰艳平, 张丽, 赵岩, 渠云芳, 黄晋玲

单位：山西农业大学 农学院, 山西 太谷 030801

关键词：棉花,<i>GhPDP</i>基因,原核表达,条件优化,

基金：国家重点研发计划项目（2018YFD0100301）

丙酮酸脱氢酶磷酸酶GhPDP与棉花雄性不育能量调控方面密切相关。为了得到大量有活性的GhPDP蛋白，试验将对目的蛋白原核表达条件进行优化。将编码GhPDP基因的cDNA序列插入pET-22b中构建重组表达载体pET-22b-GhPDP，转化到大肠杆菌Transetta（DE3）进行IPTG诱导表达，通过单因素试验和正交试验对诱导温度、诱导时间、IPTG终浓度和OD600进行优化，利用SDS-PAGE和GeneTools凝胶分析软件分析目的蛋白的表达量，以摸索目的蛋白可溶性表达的最佳条件。结果显示，成功构建重组表达载体pET-22b-GhPDP；目的蛋白在Transetta（DE3）菌株中表达，表达形式多为包涵体；单因素试验结果表明，在诱导温度20℃、诱导时间为5 h、IPTG终浓度0.10 mmol/L和菌体密度OD600为0.8条件下，目的蛋白可溶性表达量最高；通过正交分析得出，影响目的蛋白可溶性表达的因素强度由高到低依次为诱导温度、IPTG终浓度、诱导时间及菌体密度OD600。综合单因素试验和正交试验结果，确定诱导的最佳条件：菌体密度OD600为0.8、诱导温度为20℃、诱导时间为5 h、IPTG终浓度为0.10 mmol/L。

来源：2020年第5期

《华北农学报》期刊编辑部

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