华北农学报

作者：晁毛妮, 胡喜贵, 张晋玉, 王润豪, 温青玉, 孙新凯, 黄中文

单位：1. 河南科技学院, 现代生物育种河南省协同创新中心, 河南 新乡 453003;；2. 河南省农业科学院, 河南 郑州 450002

关键词：大豆,二酰甘油酰基转移酶(DGAT),启动子,油脂,GUS,

基金：国家自然科学基金项目（31601347）；河南省科技攻关计划（192102110024）；河南省博士后基金项目（1902042）；河南省研究生教育改革与质量提升工程项目（豫学位[2018]23号）

二酰甘油酰基转移酶（DGAT）是催化三酰甘油生物合成的关键酶，在三酰甘油的合成和积累过程中具有重要调控作用。为了研究大豆DGAT基因表达调控的分子机制，以大豆品种科丰1号为材料，通过PCR方法对GmDGAT1A的启动子（promoter-GmDGAT1A，pGmDGATIA）进行克隆，并通过转化拟南芥和GUS组织定位研究其功能。结果表明：以大豆叶片DNA为模板，成功克隆到GmDGAT1A基因ATG上游2 192 bp启动子序列。序列分析表明，pGmDGAT1A除具有启动子所必需的TATA-box和CAAT-box等基本顺式作用元件外，还含有多个响应于光、赤霉素和脱落酸等顺式作用元件。以GUS为报告基因，成功构建了植物表达载体pCAMBIA1381Z-pGmDGAT1A，并转化野生型拟南芥获得转基因植株。对转基因拟南芥植株进行PCR检测，能扩增到2 192 bp目标条带，表明已获得含有pGmDGAT1A的转基因拟南芥阳性植株。GUS组织化学染色结果显示，转基因拟南芥幼苗的叶脉和根染色较深，但是主根和侧根的根尖部分未染色；成熟期转基因拟南芥植株的根、叶脉以及角果内的隔膜和珠柄染色较深，茎和发育的种子未染色，表明pGmDGAT1A驱动的GUS主要在转基因拟南芥的根、叶脉以及角果内的隔膜和珠柄中表达。综上，克隆的大豆GmDGAT1A启动子具有活性，能够驱动下游目标基因的表达，有望应用于转基因育种。

来源：2020年第4期

《华北农学报》期刊编辑部

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