华北农学报

作者：殷实, 秦文昌, 王斌, 杨柳青, 周靖雯, 李键

单位：1. 西南民族大学 生命科学与技术学院, 四川 成都 610041;；2. 青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部 重点实验室, 四川 成都 610041;；3. 青藏高原动物遗传资源保护与利用四川省重点实验室, 四川 成都 610041;；4. 西南民族大学 现代生物技术国家民委重点实验室, 四川 成都 610041

关键词：牦牛,组蛋白去乙酰化,<i>SIRT1</i>,基因克隆,睾丸,

基金：中央高校基本科研业务费专项基金项目（2018NQN33）；四川省科技支撑计划（2017NZ0076）

旨在克隆牦牛SIRT1基因，预测SIRT1蛋白的结构和功能，并检测其在牦牛不同组织及不同年龄睾丸中的表达和定位。9只健康雄性牦牛被划分为幼年组（0.5~1岁）、青年组（2~3岁）及成年组（4~5岁）（每组3头），其中来源于同一年龄阶段的3个组织样本视为生物学重复。采集成年期牦牛肝脏、心脏、脾脏、脑、肌肉、小肠以及3个时期牦牛睾丸组织。分别提取各组织的总RNA并利用反转录PCR （Reverse transcription PCR，RT-PCR）技术克隆获得牦牛SIRT1的基因序列，使用不同的生物信息学软件预测SIRT1基因的序列同源性，以及其编码蛋白质的氨基酸序列、结构和性质；通过实时荧光定量PCR （Quantitative Real-time PCR，qRT-PCR）检测SIRT1基因的mRNA在牦牛各组织及不同发育阶段睾丸中的表达水平，利用色素原位杂交（Chromogenic in situ hybridization，CISH）技术检测SIRT1 mRNA在不同阶段睾丸中的定位，利用Western Blot技术检测SIRT1蛋白在不同阶段睾丸中的表达。结果表明，SIRT1基因的开放阅读框（Open reading frame，ORF）为1 866 bp，编码621个氨基酸，其基因序列在哺乳动物中高度保守。结构预测表明，SIRT1是一个脂溶性疏水蛋白，含有一个保守的沉默信息调节子2（Silent information regulator 2，Sir2）结构域。该基因的mRNA在牦牛的各个组织中广泛表达，在睾丸、卵巢和肝脏中的表达较高。在牦牛睾丸中SIRT1的mRNA定位在除精细胞之外的各类细胞中，SIRT1的蛋白在牦牛睾丸中的表达随年龄增长呈现持续下降的趋势，其中在幼年期表达最高。研究结果为揭示SIRT1在牦牛生长发育，尤其是睾丸发育过程中的调控提供了一定的基础数据。

来源：2020年第4期

《华北农学报》期刊编辑部

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