华北农学报

作者：向华, 黄忍, 朱江江, 岳华, 汤承, 张焕容

单位：1. 西南民族大学 生命科学与技术学院, 四川 成都 610041;；2. 青藏高原动物遗传资源保护与利用, 四川省重点实验室, 四川 成都 610041

关键词：山羊,羊口疮病毒,ORFV129锚蛋白,生物信息学分析,真核表达,亚细胞定位,

基金：中央高校基本科研业务费专项资金（2019NQN50）

为明确羊口疮病毒ORFV129锚蛋白在细胞中的定位，参照GenBank中收录的ORFV SY 17全基因组（登录号：MG 712417.1）序列设计引物，扩增ORFV129基因完整编码框并测序鉴定，利用生物信息学软件分析该基因编码蛋白的氨基酸序列、蛋白跨膜区域，预测其亚细胞定位；并将ORFV129完整基因连接到真核表达载体pEGFP-N1，经双酶切鉴定及测序鉴定是否成功构建重组表达质粒pEGFP-ORFV129；利用LipoGeneTM 2000介导将pEGFP-ORFV129转染新生山羊睾丸原代细胞，通过Western Blot鉴定ORFV129蛋白是否正确表达，同时，经DAPI核酸染料对细胞核进行染色后，激光共聚焦显微镜观察ORFV129蛋白的亚细胞定位。结果显示，成功扩增ORFV129完整基因，该基因全长大小为1 551 bp，测序鉴定其正确；生物信息学分析发现，其编码516个氨基酸，含有8种锚蛋白ANKs重复基序（ANKs），不存在跨膜区域，亚细胞定位预测其蛋白主要定位于细胞质；Western Blot结果显示，转染了pEGFP-ORFV129重组质粒的山羊睾丸原代细胞中检测到了ORFV129蛋白的表达；亚细胞定位结果表明，ORFV129蛋白主要定位于细胞质，与预测结果一致。研究结果为进一步探明ORFV129蛋白在诱导机体免疫应答中的作用奠定了基础。

来源：2020年第4期

《华北农学报》期刊编辑部

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