华北农学报

作者：刘晴坤, 冯华, 任春晓, 魏蔷, 刘运超, 张改平

单位：1. 河南农业大学 生命科学学院, 河南 郑州 450002;；2. 河南省农业科学院 动物免疫学重点实验室, 河南 郑州 450002;；3. 郑州大学 生命科学学院, 河南 郑州 450001

关键词：猪圆环2型病毒,小分子泛素相关修饰物,衣壳蛋白,B细胞表位,免疫原性,

基金：河南省重点研发与推广专项（182102110087）

为了研制廉价高效的猪圆环病毒2型（PCV2）亚单位疫苗，根据大肠杆菌密码子的偏好性合成PCV2b（GenBank：AY969004.1）cap基因全序列，利用PCR技术，分别将PCV2的2个B细胞表位（226LKDPPLNP233和195HVGLGTAF202）以单独和串联的方式连接到Cap的C端，成功构建至pE-SUMO表达载体，将3个重组载体转化表达菌株BL21（DE3）后诱导表达，经SDS-PAGE分析和Western Blotting鉴定，3种重组蛋白均以可溶形式表达且表达正确。对3种重组蛋白分别进行镍柱亲和层析纯化，再用SUMO蛋白酶除去融合标签，获得无标签的Cap-e1、Cap-e2和Cap-e12蛋白，并分别与相应的弗氏佐剂等体积乳化，将20只6周龄大小的雌性Balb/c小鼠随机分成5组，分别免疫3种重组蛋白，同时设置疫苗组和PBS组作为对照组，并进行免疫评价，比较C末端连接的不同B细胞表位对Cap免疫原性的影响。抗体检测结果表明，除第2周外，各试验组的抗体水平均显著高于PBS组，且连接2个表位的Cap-e12蛋白产生的抗体水平高于只连接1个表位的蛋白（Cap-e1、Cap-e2），而在第6周时，Cap-e12蛋白抗体水平与疫苗组无显著差异。综上Cap的免疫原性与连接表位数量有关，连接2个表位后能显著提高Cap的免疫原性。

来源：2020年第3期

《华北农学报》期刊编辑部

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