华北农学报

作者：李欣, 崔秀明, 刘迪秋, 孙恬, 郭爱玲, 陈军

单位：1. 昆明理工大学 生命科学与技术学院, 云南 昆明 650500;；2. 云南省三七资源可持续利用重点实验室, 云南 昆明 650500;；3. 天方健(中国)药业有限公司, 广东 广州 510623

关键词：三七根腐病,尖孢镰刀菌,分子检测,实时荧光定量PCR,快速检测,

基金：国家自然科学基金项目（81560610）；云南省科技厅重大专项（2017ZF2001）

为了建立一种准确、快速检测三七根腐病病原真菌尖孢镰刀菌的实时荧光定量PCR方法，基于尖孢镰刀菌脂肪酸ω-羟化酶基因设计了实时荧光定量PCR的特异性引物对Fo-QF和Fo-QR，制备了该基因的重组质粒标准品，建立了尖孢镰刀菌的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法。从三七种植区采集到14个具有根腐病、黑斑病典型症状的三七病株及三七种植土壤样品，并提取了这些样品的总DNA，运用本研究建立的荧光定量PCR方法进行了检测。结果显示，本研究建立的实时荧光定量PCR检测方法特异性强，脂肪酸ω-羟化酶基因只以尖孢镰刀菌DNA为模板扩增出特异的PCR产物。此外，该方法灵敏度高，检测模板浓度可低至0.35 pg/μL。构建的荧光定量PCR标准曲线Ct值与模板浓度呈良好的线性关系，熔解曲线的吸收峰单一，扩增效率好。利用该定量检测体系，能从几种不同的三七病株中快速检测出携带尖孢镰刀菌的根腐病病株，从而达到准确诊断的目的。本方法不仅能明确三七种植土壤以及三七病株中尖孢镰刀菌数量的动态变化，并且可以为三七土壤处理、根腐病的早期诊断和动态监测以及带病三七种子、种苗的快速分子检测提供技术支持。

来源：2019年第S1期

《华北农学报》期刊编辑部

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