华北农学报

作者：刘自敏, 王小朋, 白彩霞, 杨侃侃, 张学琪, 胡子慧, 孙裴, 王勇

单位：安徽农业大学 动物科技学院, 兽医病理生物学与疫病防控安徽省重点实验室, 安徽 合肥 230036

关键词：羊口疮病毒,<i>121</i>基因,原核表达,生物信息学,

基金：国家重点研发计划（2018YFD0502006）；国家自然科学基金项目（31602063）；安徽农业大学大学生科技创新基金项目

为了对羊口疮病毒（ORFV）安徽株121基因进行原核表达及生物信息学分析。以ORFV AH-F10株为模板对121基因进行PCR扩增，将扩增产物克隆至pGEX-6P-1原核表达载体，构建重组质粒pGEX-6P-1-121 ，并进行测序鉴定。经鉴定正确后的重组质粒转化至E.coliRosetta感受态细胞进行IPTG诱导表达，并对重组蛋白的诱导条件进行优化，确定了ORFV 121重组蛋白表达的最佳条件。SDS-PAGE及Western-blot鉴定结果表明，重组蛋白大小约为60 ku，在Rosetta中高效表达，主要以包涵体形式存在且具有良好的反应原性。包涵体蛋白经过纯化后得到目的蛋白，将纯化蛋白与弗氏佐剂进行乳化后皮下注射6周龄的BALB/c雌鼠。每14 d后加强免疫1次，4次后收集小鼠血清。对收集到的血清进行Western-blot特异性鉴定，该抗体血清可以和阳性原核表达的ORFV 121蛋白进行特异性反应，表明成功制备鼠源多抗血清。利用生物信息学相关软件对目的基因编码蛋白的理化性质、信号肽、跨膜结构域、磷酸化位点、二级结构和B细胞表位进行预测。结果显示该蛋白等电点为8.86，属不稳定的亲水性蛋白；预测有50个可能的磷酸化位点，无信号肽和跨膜结构域；二级结构中以无规则卷曲结构居多占62.25%，α-螺旋、β-转角、延伸链分别占27.81%，2.98%，6.95%；预测该蛋白存在8个潜在B细胞优势表位。成功表达了ORFV AH-F10 121蛋白并预测其生物学特性，为该蛋白结构与功能及ORFV致病机理的深入研究奠定基础。

来源：2019年第S1期

《华北农学报》期刊编辑部

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