华北农学报

作者：王双, 杨瑞, 白薇

单位：1. 内蒙古农业大学 植物逆境生理与分子生物学自治区重点实验室, 内蒙古 呼和浩特 010018;；2. 内蒙古赛科星繁育生物技术(集团)股份有限公司, 内蒙古 呼和浩特 010018

关键词：水稻,WRKY转录因子,RNA干扰,载体构建,表达分析,

基金：国家自然科学基金项目（31560535）

为研究水稻WRKY蛋白在应对各种生物以及非生物胁迫中发挥的作用，探明OsWRKY76是否参与调控水稻系统获得抗性，明确OsWRKY在植物抗病及耐逆反应过程中的作用机理，对OsWRKY76进行了氨基酸序列分析，发现OsWRKY76具有典型的WRKY结构域，属于WRKY-GCM1锌指WRKY超家族。克隆了OsWRKY76中300 bp的cDNA片段OsWRKY76-300，并扩增GUS基因中500 bp的片段作为连接物，通过片段末端人为增加的酶切位点将上述片段与Gateway系统的入门载体pENTR L16连接，形成中间由GUS 500连接、两端是OsWRKY76-300反向重复的发夹结构的载体，利用LR反应将dsWRKY76 pENTR L16中发夹结构的插入片段分别重组到诱导型双元载体GVG-TA7002和组成型双元载体Ubi-C1300中，获得RNA干扰载体。利用农杆菌介导的转化方法将诱导型双元表达载体转化水稻，获得7个转化株系。利用实时定量RT-qPCR检测转化株系中OsWRKY76的表达量，获得了2个沉默株系。

来源：2019年第6期

《华北农学报》期刊编辑部

查看华北农学报杂志2019年第6期