华北农学报

作者：张梦瑶, 杨峰, 刘开东, 刘积凤, 柳楠, 贺建宁, 薛明

单位：1. 青岛农业大学 动物科技学院, 山东 青岛 266109;；2. 青岛畜牧兽医研究所, 山东 青岛 266121;；3. 内蒙古农业大学, 内蒙古 呼和浩特 010018;；4. 全国畜牧总站, 北京 100125

关键词：敖汉细毛羊,成纤维细胞,质粒构建,<i>BMP4</i>基因转染,RT-PCR,Western Blot,

基金：国家自然科学基金项目（31402047）；国家绒毛用羊产业技术体系专项资金（CARS-39-05）；青岛农业大学高层次人才科研基金项目（631410）

旨在构建敖汉细毛羊BMP4基因的质粒及转染成纤维细胞后研究基因表达量的变化。以30日龄的敖汉细毛羊胚胎为研究对象。首先，通过RNA的提取反转录成cDNA参照GenBank中BMP4基因序列信息设计1对引物，通过PCR反应扩增获得BMP4基因片段、将得到的BMP4基因连接到pEASYTM-T1载体，构建pEASYTM-T1-BMP4重组质粒并转化大肠杆菌（E.coli）DH5α感受态细胞提取质粒进行酶切鉴定。鉴定正确后构建pcDNA3.1-BMP4重组质粒，转化大肠杆菌（E.coli）DH5α感受态细胞；其次对敖汉细毛羊的成纤维细胞进行分离培养，并将重组pcDNA3.1-BMP4表达载体转染成纤维细胞，后检测BMP4基因在mRNA和蛋白水平上表达量的变化。结果显示：pcDNA3.1-BMP4构建成功后转染成纤维细胞BMP4基因的mRNA和蛋白表达量均显著上升，且转染组的表达量极显著地高于对照组（P < 0.01）。成功构建了敖汉细毛羊BMP4基因的质粒，并且成功转染成纤维细胞，基因在细胞中过表达，结果可为进一步研究其功能奠定基础。

来源：2019年第6期

《华北农学报》期刊编辑部

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