华北农学报

作者：郭兆来, 孙旭东, 杨永平, 徐慧妮

单位：1. 昆明理工大学 生命科学与技术学院, 云南 昆明 650500;；2. 中国科学院 昆明植物研究所, 云南 昆明 650201

关键词：拟南芥,<i>LBD15</i>,酵母双杂交系统,蛋白互作,

基金：国家自然科学基金项目（31400244；31460526；31760582）；云南省自然科学基金项目（2017FB050）

为了进一步挖掘拟南芥LBD逆境胁迫响应基因在植物非生物逆境胁迫应答中的作用，探究拟南芥逆境胁迫响应机理，将前期筛选到的LBD15基因构建到pGBKT7酵母表达载体上，筛选与LBD15互作的蛋白。利用酵母双杂交技术筛选了拟南芥全长均一化的酵母文库，在本次筛库试验中，146个样有107个测出序列，通过NCBI Blast分析，其中有96个获得了基因号，占总数的87.9%。根据基因号进行分类，得到了48个蛋白，在筛选到的48个蛋白中有59%的蛋白都是有重复的。然后把基因号通过网站TAIR（www.arabidopsis.org/index.jsp）查找其蛋白序列，通过亚细胞定位预测网站（http：//cello.life.nctu.edu.tw/）分析其亚细胞定位，定位分析结果表明，这些蛋白主要定位于叶绿体、细胞质和细胞核。利用Blast2GO进行Gene Ontology注释显示互作蛋白共参与了14个生物过程，包括细胞过程、代谢过程、刺激响应、生物过程的调控、单组织和多组织过程及发育进程调控等。对得到的可能互作蛋白随机挑选了5个进行了互作蛋白的分离和回复验证，结果发现，AP19蛋白及其他一些蛋白的菌落能够在营养缺陷型的平板上正常生长，进一步证实了其为互作蛋白。酵母双杂交文库的成功筛选为进一步研究拟南芥LBD15的分子作用机制奠定了基础。

来源：2019年第5期

《华北农学报》期刊编辑部

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