华北农学报

作者：王晓静, 孙林静, 孙玥, 张融雪, 李军玲, 闫双勇, 苏京平

单位：天津市农作物研究所 天津市农作物遗传育种重点实验室, 天津 300384

关键词：水稻,水孔蛋白,HA标签,蛋白表达,

基金：转基因生物新品种培育重大专项（2016ZX08001004-002）；国家重点研发计划"七大作物育种"重点专项（2017YFD0100505；2017YFD0100506）；天津市自然科学基金项目（19JCQNJC14000）

为研究水稻水孔蛋白OsPIP2；7基因在非生物胁迫中的生物学功能，根据OsPIP2；7基因序列设计特异性引物，以水稻品种中花11的三叶龄叶片RNA反转录的cDNA第一链为模板，克隆OsPIP2；7。采用嵌套PCR的方法，将3×HA标签的碱基序列连接在去除终止子OsPIP2；7基因序列的3'端，然后将此核酸片段插入到植物双元表达载体pHB中，构建pHB-OsPIP2；7-3×HA载体。以中花11成熟胚愈伤组织为材料，采用农杆菌介导的方法进行遗传转化，经过在含有潮霉素的培养基上筛选和分化，获得阳性转化子。提取转基因植株的DNA，进行潮霉素阳性植株的筛选。将阳性植株进行RNA表达检测，获得OsPIP2；7基因表达量上升的转基因阳性植株。为了检测转基因植株中OsPIP2；7蛋白的表达情况，提取OsPIP2；7基因表达上升的转基因植株膜蛋白后，用HA抗体进行杂交的Western-blot检测结果显示，OsPIP2；7-HA蛋白在转基因阳性植株体内过量表达。获得的过表达OsPIP2；7转基因新材料，将为研究OsPIP2；7基因的生物学新功能提供试验基础。

来源：2019年第5期

《华北农学报》期刊编辑部

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