华北农学报

作者：李春燕, 张翠绵, 柴建芳, 秘彩莉, 马秀英, 赵和, 吕孟雨, 周硕, 董福双, 刘永伟, 杨帆, 王海波

单位：1. 河北省农林科学院 遗传生理研究所, 河北省植物转基因中心, 河北 石家庄 050051;；2. 河北师范大学 生命科学学院, 河北 石家庄 050024

关键词：小麦,麦谷蛋白亚基,SDS-PAGE,优化,分离方法,

基金：国家转基因生物新品种培育重大专项（2016ZX08002005）；河北省自然科学基金项目（C2014301005）；河北省现代农业科技创新工程（2019-4-8-1）

小麦高分子量、低分子量麦谷蛋白亚基组成是影响小麦加工品质的重要因素，为了经济快速鉴定小麦高低分子量麦谷蛋白亚基组成，需要不断对提取和分离这些蛋白的方法进行优化。在Singh等提出的提取分离小麦高低分子量麦谷蛋白亚基方法的基础上，对其中涉及的单体蛋白去除、麦谷蛋白还原和烷化过程中使用的异丙醇浓度、烷化剂浓度以及烷化过程能否简化几个关键因素进行了深入研究。结果表明：在麦谷蛋白还原时，在10%~50%的异丙醇浓度范围内，不同浓度的异丙醇对高分子量麦谷蛋白亚基的提取效果没有差别，而低分子量麦谷蛋白亚基在用低浓度异丙醇提取时效果较差，随异丙醇浓度提高，提取效果逐渐提高，异丙醇浓度提高到30%时，提取效果达到最高，异丙醇浓度继续提高到50%，提取效果不再提高；使用30%和50%的异丙醇，去除单体蛋白的效果相同；把烷化剂直接加到样品缓冲液中进行烷化，不同浓度（0.6%~1.4%）的烷化剂处理麦谷蛋白亚基的烷化效果相同，但烷化剂浓度为1.4%时电泳背景较重。优化后的方法为：在单体蛋白去除和麦谷蛋白还原时把异丙醇浓度由原来的50%降为30%，去掉单独的烷化步骤，把0.6%的烷化剂直接加到样品缓冲液中进行烷化。优化后的方法不但减少了试剂用量，简化了提取步骤，还提高了电泳条带强度。

来源：2019年第4期

《华北农学报》期刊编辑部

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