华北农学报

作者：杨艳艳, 乔松林, 李睿, 郭军庆, 李青梅, 滕蔓, 王丽, 赵东, 李学伍, 邓瑞广, 张改平

单位：1. 河南省农业科学院 动物免疫学重点实验室, 河南 郑州 450002;；2. 河南农业大学 牧医工程学院, 河南 郑州 450002

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒,免疫过氧化物酶单层细胞试验,筛选,单克隆抗体,

基金：国家重点研发计划重点专项（2016YFD0500700）；国家自然科学基金青年科学基金项目（31602036）

为了得到一种能够高通量检测细胞培养物的方法，并将其用于筛选特异性强、敏感度高的抗猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）单克隆抗体。用每孔能感染约100个细胞的病毒量接种单层覆盖96孔板的Marc-145细胞，12 h后用含3% H2O2的甲醇固定细胞，以制备免疫过氧化物酶单层细胞试验（IPMA）反应板。以100 μL/孔的量将融合后继续培养10 d的杂交瘤细胞的培养上清加入至IPMA反应板，以辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG-HRP作为二抗，以3-氨基-9-乙基咔唑（AEC）作为显色底物，于倒置显微镜下进行观察。结果表明，共筛选出1D1、7G8等39份PRRSV单克隆抗体，这39份单抗能够使PRRSV中高致病毒株HN07-1和经典毒株BJ-4感染的Marc-145细胞被特异性染色，而对猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪流行性腹泻病毒感染的Marc-145细胞无交叉染色。因此，构建的IPMA方法能够敏感、准确地捕捉到PRRSV单克隆抗体。

来源：2019年第3期

《华北农学报》期刊编辑部

查看华北农学报杂志2019年第3期