华北农学报

作者：张梦瑶, 杨峰, 刘积凤, 刘开东, 贺建宁, 柳楠

单位：1. 青岛农业大学 动物科技学院, 山东 青岛 266109;；2. 青岛畜牧兽医研究所, 山东 青岛 266121;；3. 内蒙古农业大学, 内蒙古 呼和浩特 010018

关键词：敖汉细毛羊,成纤维细胞,<i>Hoxa5</i>,<i>BMPR1B</i>,基因互作,质粒构建,RT-PCR,Western Blot,

基金：国家自然科学基金项目（31402047）；国家绒毛用羊产业技术体系专项资金（CARS-39-05）；青岛农业大学高层次人才科研基金（631410）

旨在构建敖汉细毛羊Hoxa5、BMPR1B基因的质粒及共转染成纤维细胞后，通过基因表达量变化研究两基因的互作。以敖汉细毛羊为研究对象，采集40日龄的胎羊。首先，通过RNA的提取反转录成cDNA，参照GenBank中Hoxa5、BMPR1B基因序列信息分别设计1对引物，通过PCR反应扩增获得Hoxa5、BMPR1B基因片段，将得到的Hoxa5、BMPR1B基因分别连接到pEASYTM-T1载体，构建pEASYTM-T1-Hoxa5、pEASYTM-T1-BMPR1B重组质粒并转化大肠杆菌（E.coli）DH5α感受态细胞，提取质粒进行酶切鉴定。鉴定正确后构建pcDNA3.1-Hoxa5、 pcDNA3.1-BMPR1B重组质粒，转化大肠杆菌（E.coli）DH5α感受态细胞。其次，对敖汉细毛羊的成纤维细胞进行分离培养，并将构建的质粒pcDNA3.1-Hoxa5、 pcDNA3.1-BMPR1B共转染成纤维细胞，利用荧光定量PCR技术和Western Blot技术检测Hoxa5、BMPR1B基因单转染和共转染在成纤维细胞中表达量的变化。结果显示，经酶切、测序鉴定质粒pcDNA3.1-Hoxa5、 pcDNA3.1-BMPR1B构建成功，并且共转染成纤维细胞BMPR1B基因的表达量明显下降，Hoxa5基因的表达量明显升高且共转染组的表达量极显著地高于单转染组（P<0.01）。成功构建了敖汉细毛羊Hoxa5、BMPR1B基因的质粒，并且成功共转染成纤维细胞，Hoxa5基因的表达量明显升高，BMPR1B基因的表达量明显下降，因而Hoxa5基因抑制了BMPR1B基因的表达，BMPR1B基因促进了Hoxa5基因的表达，结果可为进一步研究其功能奠定基础。

来源：2019年第2期

《华北农学报》期刊编辑部

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