华北农学报

作者：蒲艳, 刘晓东, 阿尔祖古丽·塔什, 魏倩, 刘超

单位：新疆农业大学 农学院, 新疆农业大学农业生物技术重点实验室, 新疆 乌鲁木齐 830052

关键词：番茄,<i>SlU3</i>启动子,克隆,农杆菌转化,番茄叶片,

基金：国家自然科学基金项目（31560534）

从中蔬四号番茄品种中克隆能在番茄叶片中高效转录的SlU3启动子，为今后利用CRISPR/Cas9基因编辑技术进行分子育种奠定了基础。采用2轮PCR的方法，第1轮PCR从中蔬四号番茄品种中克隆了3种SlU3启动子，再采用Transfer PCR方法分别对3个启动子进行截短，共得到6个不同长度的启动子，并分别构建6个截短的SlU3启动子驱动GUS融合植物表达载体，利用农杆菌转化法分别转染番茄叶片。运用DNAMAN软件对已克隆的SlU3和拟南芥AtU3启动子序列具有转录功能的必要元件进行序列分析；经过2轮PCR，首先从中蔬四号番茄品种中克隆了3种SlU3-1P、SlU3-3P、SlU3-4P启动子，其长度分别是1 156，1 114，1 147 bp，再采用Transfer PCR方法分别对3个启动子进行截短，共得到6个不同长度的启动子，其长度依次是489，318，450，248，457，248 bp，并分别构建6个截短SlU3启动子驱动GUS融合植物表达载体，启动子序列比对分析发现，番茄U3启动子与拟南芥U3启动子一样，也含有比较保守的2个元件，USE和TATA框，2个元件之间的位置比较固定。利用农杆菌转化法分别转染番茄叶片，结果显示，成功侵染后的番茄叶片均被染成蓝色，表明已克隆的6种不同截短番茄SlU3启动子均具有转录活性。成功克隆了6种在番茄叶片中高效转录的SlU3启动子，为构建番茄CRISPR/Cas9基因编辑载体提供更多高效的内源启动子。

来源：2019年第1期

《华北农学报》期刊编辑部

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